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談?wù)勆窠?jīng)元原代培養(yǎng)細(xì)胞實驗的步驟

更新時間:2023-08-17      點擊次數(shù):1278
  神經(jīng)元原代培養(yǎng)是將胚胎哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的部分組織,如大腦皮層、海馬、脊髓等腦組織直接取出,再接種培養(yǎng)的方法。目前國內(nèi)、外有關(guān)神經(jīng)元培養(yǎng)的方法較多,但在原代培養(yǎng)中神經(jīng)元的純度和產(chǎn)量方面還存在一些急待解決的問題。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細(xì)胞,相對于其它細(xì)胞而言,神經(jīng)元在體外更難以存活和生長。因此,體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營養(yǎng)條件均較為特殊。
  神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)是研究神經(jīng)源性疾病的發(fā)病機(jī)制、進(jìn)程的一個重要工具,能很好的、直觀的反映離體神經(jīng)元的發(fā)育狀況和生理活性,如何建立一個穩(wěn)定成熟的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)體系是神經(jīng)系統(tǒng)疾病體外實驗研究順利進(jìn)行的基礎(chǔ)。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)研究的逐漸深入,神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)在腦損傷、神經(jīng)障礙性疾病、衰老相關(guān)神經(jīng)疾病方面得到廣泛重視和普及應(yīng)用。
  神經(jīng)元原代培養(yǎng)細(xì)胞實驗步驟:
  1、75%(體積分?jǐn)?shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中(下置冰袋)。
  2、解剖顯微鏡無菌條件下仔細(xì)剝離脊膜及血管。
  3、用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;
  4、去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次。
  5、4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min;
  6、收集上清,臺盼藍(lán)染色計數(shù),按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
  7、培養(yǎng)第二天,全換液更換為種植液2;
  8、培養(yǎng)第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;
  9、之后每周換液兩次。
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